基督教莫愁路堂，位于南京市白下区莫愁路309号，是南京市文物保护单位，南京市优秀民国建筑。现为南京市基督教主要的传教、布道场所。
19世纪80年代，南京基督教会在四根杆子（江苏省中医院临莫愁路一带）建有基督教自立会汉中堂。1934年底，因南京市政府修建莫愁路，将汉中堂拆除，南京基督教会决定择址重建教堂。北美长老会19世纪设立的南京四根杆子礼拜堂。1927年成为中华基督教会汉中堂，1930年代开辟莫愁路时，于1936年至1942年兴建今天的礼拜堂。
1958年实行各宗派联合礼拜以后,不再专属于中华基督教会一个教派。文化大革命期间曾被占用，1981年归还教会，并加以修整。
1982年，基督教莫愁路堂被列为现在的莫愁路堂。教堂西南侧墙角镶嵌有冯玉祥将军于1936年为教堂落成而题写的正方形花岗岩楷体竖书石碑“因为那立好了根基的就是耶稣基督”。
莫愁路堂是由陈明记营造厂的老板陈裕华设计，陈明记营造厂承建，牧师孙希圣主持建造，全部费用预定为黄金1100两。1936年5月19日举行破土动工典礼，8月2日奠基。 因抗战爆发，延至1942年才建成，同年10月16日举行献堂典礼。
“文化大革命”期间，该教堂被南京市红卫印刷厂占用。
1981年，南京市人民政府将莫愁路堂归还给宗教部门，并加以整修，恢复了宗教活动。
1992年，基督教莫愁路堂被列为南京市文物保护单位。
